在這里，公討論溶液物質(zhì)的光子產(chǎn)額的測(cè)定技術(shù)。人測(cè)定光子產(chǎn)額的歷史看，要消除全部誤差是非常難的，而且也不存在一種理想的測(cè)定方法。因此，為了鑒定每種化合物的光子產(chǎn)額就需要許多的獨(dú)立方法。

 

1、光散射法

  作為理想散射的物質(zhì)，當(dāng)它被光照射時(shí)釋放所有的光子而不改變其波長(zhǎng)。對(duì)于實(shí)際應(yīng)用，則可把這物質(zhì)的光子產(chǎn)額視為等于1。

  具體研究了兩種散射源即噴涂氧化鎂的玻璃和肝糖膠體溶液。

  瓦維洛夫首先建議噴除氧化鎂的玻璃作為校準(zhǔn)液體化合物的光子產(chǎn)額的參考材料。氧化鎂散射體作為基準(zhǔn)材料的不足之點(diǎn)在于：

  （1）  氧化鎂涂層老化迅速；

  （2）  其反射比與涂層的制備法及其厚度有關(guān)；

  （3）  其反射比在紫外區(qū)明顯下降。

  此外，在將固體表面的反射與液池中熒光化合物的發(fā)射作比較時(shí)，可能出現(xiàn)一些問(wèn)題。要特別注意標(biāo)準(zhǔn)與試樣之間的偏振變化，心及液池里的內(nèi)反射。由于反射的差異，可能造成高達(dá)20%的誤差。為了避免標(biāo)準(zhǔn)單色儀這類(lèi)問(wèn)題，應(yīng)使用若丹明B作為探測(cè)系統(tǒng)。雖然可對(duì)這么多的變量做校正，但是做起來(lái)也相當(dāng)麻煩。對(duì)于光密溶液，膠體溶液或許比基準(zhǔn)材料好些。

  這個(gè)技術(shù)的最大吸引力是，許多的市售熒光計(jì)勿須進(jìn)行改裝即可使用。在比較散射標(biāo)準(zhǔn)和熒光試樣的信號(hào)時(shí)，主要考慮的修正因子是：

  （1）  探測(cè)系統(tǒng)的光譜響應(yīng)度的校正；

  （2）  標(biāo)準(zhǔn)與試樣之間偏振差異的校正；

  （3）  標(biāo)準(zhǔn)與試樣之間折射率和光學(xué)密度的差異；

在選擇光散射標(biāo)準(zhǔn)時(shí)必須考慮到：

  （1）  可能出現(xiàn)的光吸收和熒光污染；用瑞利定律吸收度Xλ=const

  （2）  測(cè)定散射標(biāo)準(zhǔn)和熒光試樣的吸收度的適合手段。

  （3）  散射溶液的穩(wěn)定性，即肝糖等溶液在貯存過(guò)程中會(huì)發(fā)生水解。

2、幾何條件的絕對(duì)評(píng)估

  這種方法對(duì)于光密度液是有價(jià)值的，但對(duì)稀淡溶液很少令人滿意。在液池位置引入量子計(jì)數(shù)器或量子探測(cè)器直接測(cè)量激發(fā)強(qiáng)度，而不用光散射器。該方法的優(yōu)點(diǎn)是不測(cè)量散射器的反射性質(zhì)。雖然這種方法離不開(kāi)量子計(jì)數(shù)器或探測(cè)器，但在市場(chǎng)上可以得到合適的配置。使用化學(xué)感光計(jì)改進(jìn)了這一方法。

  改進(jìn)法的原理是，用化學(xué)感光計(jì)測(cè)定入射在試樣液池上的輻通量。當(dāng)試樣被相同的化學(xué)感光計(jì)幾乎完全包圍時(shí)，放好試樣進(jìn)行輻射，以確保發(fā)射光的探測(cè)。這種技術(shù)已經(jīng)用于幾臺(tái)市售熒光光譜儀和分光光度計(jì)上。但需要改進(jìn)試樣艙。

  在一個(gè)測(cè)量系統(tǒng)中使用了激光源。做了一個(gè)細(xì)小的改進(jìn)，便使得從液池前面和背面的很小面積上發(fā)射的光也不會(huì)被感光計(jì)遮蓋住。

  該法的重要改進(jìn)是，將一個(gè)積分球作為探測(cè)系統(tǒng)的一部分。用標(biāo)準(zhǔn)光源校準(zhǔn)積分球、單色儀和光電探測(cè)器這一組合系統(tǒng)，除了較新的市售儀器之外，在改進(jìn)過(guò)程中遇到了一些困難。

3、量熱計(jì)法

  量熱計(jì)測(cè)量術(shù)與光學(xué)技術(shù)的固有誤差沒(méi)有關(guān)系，因此，它是測(cè)定光子產(chǎn)額另外一種非常有用的手段。其原理是，在無(wú)熒光的標(biāo)準(zhǔn)溶液和熒光試樣（光學(xué)密度非常相近）被照射期間，比較它們的溫度（或體積）變化。由于無(wú)熒光標(biāo)準(zhǔn)液的量子效率為零，則兩種溶液的溫度變化率給出了吸收能量與試樣輻射過(guò)程損失的能量之比。也就是光子產(chǎn)額的補(bǔ)充。但是量熱計(jì)在熒光測(cè)定中也遇到一些困難：

  （1）  探測(cè)器的靈敏度相對(duì)低，因此必須使用濃度相對(duì)高的溶液。

  （2）  要選擇合適的光源。需要譜線分立的穩(wěn)定性高的強(qiáng)光源，而且要紅外輻射弱。或許激光是合適的。

  （3）  需要特殊的試樣艙，以消除環(huán)境溫度的影響。